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制備液相色譜中,某個(gè)狀態(tài)出現(xiàn)異常可以這樣子排除

更新時(shí)間:2022-03-07瀏覽:1057次

  對(duì)制備液相色譜中的一些常用概念做一下介紹。
 ?。?)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率,制備色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長(zhǎng)度,使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。
  (2)樣品的前處理:
 ?。?)制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn)
  (4)固定相的選擇:
 ?。?)裝柱方法的選擇根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,采用不同的裝柱方法,往往裝填越好分離效果越好。
  制備液相色譜中,有三個(gè)可以觀察到的狀態(tài):柱壓、檢測(cè)器基線、譜圖。通過(guò)觀察和記錄這三個(gè)狀態(tài)可以監(jiān)測(cè)儀器是否正常。若某個(gè)狀態(tài)出現(xiàn)異常,故障排查和解決方案如下。
  1、柱壓波動(dòng)
  1)吸液管路進(jìn)氣泡①溶劑不足,吸濾頭吸入空氣,添加溶劑并排氣泡。②吸濾頭臟了或堵塞,用異丙醇(或5%稀硝酸)清洗。③溶劑中有氣泡(尤其兩種以上溶劑混合),超聲(或抽濾)脫氣。
  2)泵流量不穩(wěn)①單向閥堵塞,大流速,若不能解決,則需拆下單向閥(異丙醇)超聲清洗清洗或更換單向閥。②柱塞密封圈磨損,更換密封圈。③泵頭污染,柱塞桿往復(fù)活動(dòng)受阻,清洗泵頭。
  3)柱床塌陷,維修或更換色譜柱。
  4)流動(dòng)相混合后吸放熱導(dǎo)致溫度變化,以致柱壓波動(dòng),如乙腈和水混合吸熱,甲醇和水混合放熱。若影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,則增加柱溫箱或流動(dòng)相預(yù)混。
  2、柱壓升高或超壓。逐段排查堵塞的位置:
  1)先拆下色譜柱,接上兩通運(yùn)行,若是色譜柱堵塞:①進(jìn)樣后樣品析出,用合適的溶劑反沖色譜柱。②緩沖鹽析出,用大比例水相的流動(dòng)相沖洗色譜柱。③機(jī)械雜質(zhì)堵塞篩板,異丙醇小流速反沖色譜柱。④色譜柱污染嚴(yán)重,需維修或充填。
  2)混合器堵塞,維修或更換。
  3)六通閥堵塞,將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處,將閥扳至load狀態(tài),用易溶樣品的溶劑小流速?zèng)_洗。4)壓力傳感器故障,維修或更換。
  3、檢測(cè)器基線波動(dòng)
  1)基線有規(guī)律波動(dòng),且幅度較大,則可能有氣泡持續(xù)進(jìn)入流通池。排查氣泡來(lái)源并用異丙醇沖洗檢測(cè)器或色譜柱。
  2)基線小幅度規(guī)律波動(dòng),可能是檢測(cè)器燈能量不足(能量下降后,低波長(zhǎng)下靈敏度先下降。
  3)基線漂移。①流動(dòng)相在此檢測(cè)波長(zhǎng)下有吸收。更換流動(dòng)相或改變波長(zhǎng)。②色譜柱或檢測(cè)池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測(cè)池,或?qū)z測(cè)池中透鏡玻片取出清洗。
  4、譜圖重現(xiàn)性差1)檢查方法設(shè)置,包括流速、梯度、波長(zhǎng)。
  2)檢查流動(dòng)相配置是否有誤,A、B兩相是否放反。
  3)檢查柱壓與之前是否有差異,若有變化,則前面1和2進(jìn)行排查。
  4)進(jìn)樣前色譜柱是否*平衡好。
  5)樣品溶解方法。

 

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